Integrin α7/ITGA7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401678-ACT

ITGA7 codifica l’integrina α7, una subunità α legante la laminina che eterodimerizza principalmente con l’integrina β1 per formare un recettore di superficie cellulare fondamentale per l’adesione alla matrice extracellulare. L’integrina α7/ITGA7 sostiene l’adesione, la migrazione e la differenziazione dei mioblasti e contribuisce alla meccanotrasduzione e all’organizzazione del citoscheletro tramite vie di segnalazione delle adesioni focali, incluse le cascate FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK. Attraverso la regolazione delle interazioni cellula–matrice, ITGA7 influenza l’integrità e il rimodellamento dei tessuti, con particolare rilevanza per la biologia del muscolo scheletrico. Alterazioni dell’espressione o della funzione dell’integrina α7/ITGA7 sono state associate a fenotipi neuromuscolari e correlati alle distrofie muscolari e sono state inoltre investigate in contesti di invasione tumorale e comportamento metastatico, in cui le dinamiche di adesione risultano perturbate.

Integrin α7/ITGA7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α7/ITGA7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α7/ITGA7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α7/ITGA7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α7/ITGA7 nelle cellule tumorali con espressione di ITGA7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.