Integrin α5/ITGA5/CD49e Plasmide Double Nickase (h): sc-400546-NIC

ITGA5 codifica per l’integrina α5 (CD49e), una subunità α che eterodimerizza con β1 per formare il recettore della fibronectina α5β1, un mediatore chiave dell’adesione cellula–matrice extracellulare e della meccanotrasduzione. Il legame con la fibronectina innesca l’assemblaggio delle adesioni focali e l’attivazione di segnali attraverso le vie FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK, coordinando il rimodellamento del citoscheletro di actina, la migrazione, la proliferazione e la sopravvivenza. Le dinamiche di adesione dipendenti da ITGA5 influenzano la transizione epitelio–mesenchimale, i programmi angiogenici e il rimodellamento tissutale tramite crosstalk con le GTPasi Rho e la segnalazione dei recettori dei fattori di crescita. Un’attività α5β1 deregolata è spesso studiata nei contesti di invasione e metastasi tumorale, fibrosi e fisiopatologia vascolare e infiammatoria, in cui interazioni alterate con la matrice guidano comportamenti cellulari aberranti.

Integrin α5/ITGA5/CD49e Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGA5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGA5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGA5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGA5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.