Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401336-ACT

ITGA4 codifica l’integrina α4 (CD49d), una subunità α che si associa con β1 o β7 per formare le integrine VLA-4 (α4β1) o α4β7, che mediano l’adesione cellula–cellula e cellula–matrice. Legandosi a VCAM1, alla fibronectina CS-1 e a MAdCAM1, l’integrina α4 regola il traffico dei leucociti, l’adesione stabile e la migrazione transendoteliale, integrando la segnalazione “outside-in” con il rimodellamento del citoscheletro. La segnalazione associata a ITGA4 interseca i pathway delle adesioni focali, MAPK e PI3K, influenzando sopravvivenza, attivazione e comportamento migratorio nei compartimenti immunitario e stromale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ITGA4 sono comunemente analizzate in studi sul reclutamento delle cellule infiammatorie, sull’infiltrazione tissutale associata all’autoimmunità e sulle interazioni tumore–microambiente che coinvolgono la disseminazione metastatica e il posizionamento delle cellule immunitarie.

Integrin α4/ITGA4/CD49d Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α4/ITGA4/CD49d Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α4/ITGA4/CD49d. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α4/ITGA4/CD49d nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α4/ITGA4/CD49d nelle cellule tumorali con espressione di ITGA4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.