Integrin β3/ITGB3/CD61 Plasmide Double Nickase (m): sc-421175-NIC

Il gene murino Itgb3 codifica l’integrina β3 (ITGB3/CD61), un recettore di adesione transmembrana che si associa con αIIb o αV per formare integrine eterodimeriche fondamentali per l’aggregazione piastrinica, l’adesione cellula–matrice e la segnalazione outside-in/inside-out. ITGB3 regola la dinamica delle adesioni focali e il rimodellamento del citoscheletro attraverso vie che includono FAK/Src, PI3K–AKT e le GTPasi della famiglia Rho, coordinando migrazione, sopravvivenza e meccanotrasduzione. In contesti immunitari e stromali, le interazioni mediate da ITGB3 con ligandi della matrice extracellulare influenzano il traffico infiammatorio e il rimodellamento tissutale, mentre alterazioni della segnalazione integrinica sono state collegate, in modelli sperimentali, a disfunzioni emostatiche e a fenotipi anomali del microambiente vascolare e associato ai tumori. Queste caratteristiche rendono Itgb3 un bersaglio prezioso per studiare le reti di segnalazione dipendenti dalle integrine, la regolazione genica dipendente dall’adesione e risposte specifiche del contesto a segnali biomeccanici.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Itgb3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Itgb3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Itgb3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Itgb3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.