Integrin α2/ITGA2/CD49b Plasmide Double Nickase (h): sc-400913-NIC

ITGA2 codifica l’integrina α2 (CD49b), che eterodimerizza con l’integrina β1 per formare il recettore del collagene/laminina α2β1, che media l’adesione tra cellula e matrice extracellulare e la meccanotrasduzione. Attraverso l’accoppiamento con la segnalazione della focal adhesion kinase (FAK), le chinasi della famiglia Src e il rimodellamento del citoscheletro dipendente dalle GTPasi Rho, ITGA2 influenza la migrazione e l’invasione cellulari, nonché le risposte di sopravvivenza alla composizione e alla rigidità della matrice. Nelle piastrine e in altri tipi cellulari, α2β1 sostiene l’adesione dipendente dal collagene e la segnalazione integrinica “outside-in”, che può modulare gli stati di attivazione. L’espressione deregolata di ITGA2 o un’alterazione della segnalazione delle integrine sono spesso studiate nel contesto delle interazioni tumore–stroma, del rimodellamento fibrotico, del traffico delle cellule infiammatorie e dei fenotipi associati alla trombosi.

Integrin α2/ITGA2/CD49b Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGA2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.