IL-29 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403227-ACT

IFNL1 umano codifica l’interferone lambda 1 (IL-29), un interferone di tipo III prodotto in risposta agli acidi nucleici virali e ad altri stimoli dell’immunità innata. IL-29 segnala attraverso il complesso recettoriale eterodimerico dell’interferone lambda (IFNLR1/IL10RB) attivando le vie JAK–STAT e inducendo la trascrizione di geni stimolati dall’interferone, che contribuiscono alla restrizione antivirale, alla difesa della barriera epiteliale e a programmi immunomodulatori. Questo asse è particolarmente rilevante nei tessuti mucosali ed epiteliali, dove la distribuzione del recettore limita le risposte e influenza l’infiammazione specifica di tessuto. Una segnalazione di IFNL1 deregolata è stata associata a una diversa suscettibilità dell’ospite e a firme infiammatorie in modelli di infezione respiratoria e gastrointestinale e in contesti di malattie immuno-mediate.

IL-29 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFNL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-29 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFNL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFNL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-29. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFNL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-29 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-29 nelle cellule tumorali con espressione di IFNL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.