Plasmide CRISPR d'Activation (h) IKKβ: sc-400247-ACT

IKBKB code pour IKKβ (IκB kinase bêta), une sous-unité catalytique du complexe IKK qui phosphoryle les protéines IκB afin de déclencher leur ubiquitination et leur dégradation, permettant ainsi aux facteurs de transcription NF‑κB de transloquer vers le noyau. Par ce point de contrôle central, IKKβ régule la signalisation immunitaire innée et adaptative, les programmes de cytokines inflammatoires, la survie cellulaire et les réponses au stress en aval de récepteurs tels que TNFR, les TLR et IL‑1R. Une activité dérégulée d’IKBKB/IKKβ est associée à l’activation aberrante de la voie NF‑κB observée dans diverses pathologies inflammatoires et dans de multiples contextes cancéreux, ce qui en fait un nœud fréquemment étudié dans les travaux sur la transduction du signal et les réseaux transcriptionnels. Dans des modèles cellulaires humains, la modulation de l’expression d’IKBKB est souvent utilisée pour examiner les interactions avec la signalisation MAPK, l’apoptose et les réponses au stress métabolique.

IKKβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IKBKB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IKKβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IKBKB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IKBKB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IKKβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IKBKB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IKKβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IKKβ dans les cellules tumorales présentant une expression de IKBKB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.