IGSF4B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405765

Panoramica

CADM3 (nota anche come IGSF4B) codifica una molecola di adesione cellulare appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, che sostiene contatti cellula-cellula indipendenti dal calcio e contribuisce all’organizzazione dei microdomini di membrana nei siti delle giunzioni intercellulari. Attraverso una segnalazione dipendente dall’adesione, CADM3 può influenzare la crescita dei neuriti, la connettività sinaptica e l’architettura dei tessuti epiteliali/neurali, collegandosi a vie che regolano la polarità cellulare e il controllo della crescita mediato dal contatto. Un’espressione o una regolazione alterata di CADM3 è stata riportata in studi sui processi di neurosviluppo e in oncologia, dove cambiamenti nei programmi di adesione possono influire su invasione, differenziamento e comportamento metastatico. In quanto fattore di adesione associato alla superficie, IGSF4B è quindi rilevante per studiare come i complessi giunzionali e la segnalazione di adesione rimodellino la comunicazione cellulare e l’organizzazione tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IGSF4B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CADM3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CADM3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CADM3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IGSF4B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CADM3 per lo studio della segnalazione di IGSF4B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CADM3 critici per la funzione di IGSF4B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CADM3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IGSF4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IGSF4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CADM3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IGSF4B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IGSF4B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CADM3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CADM3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.