IGF2BP3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402603-LAC

IGF2BP3 (insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 3) è una proteina oncofetale legante l’RNA che regola l’espressione genica post-trascrizionale legandosi e stabilizzando gli mRNA bersaglio e modulandone la localizzazione e la traduzione. Partecipa alla dinamica dei granuli di RNA e influenza vie che governano la progressione del ciclo cellulare, la migrazione e le risposte allo stress, in parte attraverso il controllo di trascritti coinvolti negli output di segnalazione PI3K–AKT e MAPK. L’espressione di IGF2BP3 è bassa nella maggior parte dei tessuti adulti, ma risulta frequentemente sovraregolata in molteplici tipi di tumore, dove è associata a fenotipi aggressivi e a programmi di differenziamento alterati. Di conseguenza, IGF2BP3 è ampiamente studiata come nodo meccanicistico che collega la determinazione del destino degli mRNA a stati cellulari proliferativi e invasivi.

Le particelle di attivazione lentivirale IGF2BP3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IGF2BP3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IGF2BP3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IGF2BP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IGF2BP3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IGF2BP3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.