IGF-II Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421058-ACT

Il gene murino **Igf2** codifica il fattore di crescita insulino-simile II (IGF‑II), un fattore di crescita secreto che segnala principalmente attraverso **IGF1R** e l’**isoforma A del recettore dell’insulina** per regolare la crescita embrionale e placentare, la proliferazione e la sopravvivenza cellulare, nonché l’omeostasi metabolica. IGF‑II attiva a valle le vie **PI3K–AKT–mTOR** e **RAS–RAF–MEK–ERK**, influenzando la progressione del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento e l’utilizzo dei nutrienti. **Igf2** è un locus imprintato con un’espressione nello sviluppo strettamente controllata e la disregolazione della segnalazione di IGF‑II è stata associata, in diversi contesti, a fenotipi di crescita anomali, a un’alterata rigenerazione tissutale e a processi oncogeni. Nei modelli murini, la perturbazione di **Igf2** è ampiamente utilizzata per studiare il controllo della crescita, la regolazione epigenetica dell’imprinting e il cross-talk di segnalazione con gli assi insulina/IGF.

IGF-II Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Igf2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IGF-II Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Igf2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Igf2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGF-II. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Igf2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGF-II nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGF-II nelle cellule tumorali con espressione di Igf2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.