IFN-γRα Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401191-ACT

IFNGR1 codifica la catena alfa del recettore umano dell’interferone-γ (IFN-γRα), la subunità che lega il ligando e avvia la segnalazione dell’interferone-γ sulla superficie cellulare. Dopo il legame con IFN-γ, IFN-γRα coopera con IFNGR2 per attivare JAK1/JAK2 e, a valle, STAT1, inducendo programmi trascrizionali che regolano la presentazione dell’antigene, l’attivazione dei macrofagi e le risposte antimicrobiche e infiammatorie. Questa via interagisce con le reti IRF/ISG e modula il crosstalk tra citochine che influenza la sorveglianza immunitaria e l’infiammazione tissutale. Una segnalazione di IFNGR1 deregolata è stata associata ad alterazioni della difesa dell’ospite e a patologie immunomediate, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla biologia delle infezioni, l’infiammazione e la segnalazione in immuno-oncologia.

IFN-γRα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFNGR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFN-γRα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFNGR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFNGR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFN-γRα. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFNGR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFN-γRα nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFN-γRα nelle cellule tumorali con espressione di IFNGR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.