IFN-α7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421044

Panoramica

Ifna7 codifica l’interferone alfa-7 murino (IFN-α7), una citochina interferone di tipo I prodotta principalmente in risposta a segnali legati al rilevamento di virus e acidi nucleici. IFN-α7 si lega al complesso recettoriale IFNAR, attivando la fosforilazione di STAT1/STAT2 dipendente da JAK1/TYK2, favorendo la formazione del complesso trascrizionale ISGF3 e l’induzione di geni stimolati dagli interferoni che modulano l’immunità innata e adattativa. Questo asse di segnalazione interagisce con le vie dei recettori di riconoscimento di pattern, inclusi i TLR e i recettori di tipo RIG-I, influenzando la presentazione dell’antigene, le reti citochiniche e i programmi di restrizione antivirale. Un’attività degli interferoni di tipo I deregolata è implicata in fenotipi infiammatori e autoimmuni, nonché nelle interazioni tra tumore e sistema immunitario, rendendo Ifna7 un nodo utile per studi meccanicistici della biologia guidata dagli interferoni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ifna7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ifna7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ifna7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IFN-α7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ifna7 per lo studio della segnalazione di IFN-α7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ifna7 critici per la funzione di IFN-α7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ifna7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IFN-α7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IFN-α7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ifna7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IFN-α7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IFN-α7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ifna7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ifna7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.