IER2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407175

Panoramica

Immediate early response 2 (IER2) è un gene rapidamente inducibile e sensibile agli stimoli, che integra segnali extracellulari provenienti da fattori di crescita, segnali di stress e input mitogeni in programmi trascrizionali di breve durata. L’attività di IER2 è stata associata alla regolazione della migrazione cellulare, al rimodellamento del citoscheletro e al controllo della proliferazione dipendente dal contesto, attraverso la segnalazione immediata associata a MAPK/ERK e le conseguenti variazioni dell’espressione genica a valle. In quanto effettore “immediate early”, IER2 contribuisce a plasmare la riorganizzazione precoce delle reti trascrizionali, influenzando la dinamica dell’adesione e il comportamento invasivo in molteplici modelli cellulari. Un’alterazione dell’espressione di IER2 è stata riportata in diversi contesti rilevanti per la malattia, supportandone l’uso come nodo meccanicistico per studiare l’accoppiamento tra segnalazione e trascrizione nella biologia del cancro e nei processi legati all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IER2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IER2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IER2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IER2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IER2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IER2 per lo studio della segnalazione di IER2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IER2 critici per la funzione di IER2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IER2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IER2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IER2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IER2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IER2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IER2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IER2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IER2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.