IDS Plasmide Double Nickase (h): sc-404268-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IDS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IDS Double Nickase Plasmid (h) e il IDS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IDS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IDS Antibody (B-5): sc-365047
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IDS Plasmide Double Nickase (h) | sc-404268-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IDS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404268-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’IDS umano codifica l’iduronato-2-solfatasi, una solfatasi lisosomiale necessaria per la degradazione graduale dei glicosaminoglicani eparan solfato e dermatan solfato. Catalizzando l’idrolisi dei gruppi 2-O-solfato sui residui di acido iduronico, IDS sostiene il turnover delle macromolecole mediato dal lisosoma e si integra con processi più ampi di traffico endolisosomiale e associati all’autofagia. L’alterazione dell’attività di IDS porta ad accumulo lisosomiale con effetti secondari sulle risposte di stress cellulare, sul rimodellamento della matrice extracellulare e sulle reti di segnalazione infiammatoria. Per questo motivo, IDS è ampiamente studiato nel contesto del catabolismo dei glicosaminoglicani, della biologia lisosomiale e delle relazioni genotipo–fenotipo nei modelli di ricerca della mucopolisaccaridosi di tipo II (sindrome di Hunter).
IDS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IDS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IDS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IDS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IDS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.