Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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HXK I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401753
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HXK I Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HXK I, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HXK I Antibody (G-1): sc-46695
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HXK I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401753 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
L’HK1 umano codifica l’esochinasi I (HXK I), un enzima associato ai mitocondri che catalizza la fosforilazione del glucosio a glucosio-6-fosfato dipendente da ATP, impegnando il glucosio nella glicolisi e in vie biosintetiche correlate. Controllando il primo passaggio limitante della velocità nell’utilizzo del glucosio, HXK I influenza l’equilibrio energetico cellulare, l’omeostasi redox tramite l’accoppiamento con la via dei pentoso fosfati e il flusso di metaboliti verso la sintesi di glicogeno e nucleotidi. L’attività di HK1 è strettamente integrata con la funzione mitocondriale e con la segnalazione associata all’apoptosi attraverso interazioni sulla membrana mitocondriale esterna. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di HK1 sono state collegate a una deregolazione del metabolismo del glucosio nel cancro e a fenotipi di tipo neurosviluppo ed emolitico, a sostegno della sua rilevanza nella ricerca sulla biologia metabolica e mitocondriale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HXK I (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HK1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HK1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HK1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HXK I.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HK1 per lo studio della segnalazione di HXK I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni HK1 critici per la funzione di HXK I
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HK1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HXK I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HXK I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HK1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HXK I Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HXK I (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HK1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HK1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.