HSP 40 Plasmide Double Nickase (h): sc-402810-NIC

DNAJB1 codifica il co-chaperone umano HSP40 che regola il ciclo dell’ATPasi di HSP70 e promuove il ripiegamento, il ripiegamento corretto e lo smistamento dei clienti mal ripiegati durante lo stress proteotossico. Attraverso la stimolazione di HSP70 mediata dal suo dominio J, HSP40 sostiene le reti citosoliche di proteostasi che intersecano la risposta alle proteine mal ripiegate, la segnalazione da shock termico e il controllo di qualità mediato dal sistema ubiquitina–proteasoma e dall’autofagia. L’attività di DNAJB1 influenza la maturazione e la stabilità di numerose proteine di segnalazione, collegando la capacità chaperonica al controllo del ciclo cellulare e a programmi trascrizionali di adattamento allo stress. Una funzione chaperonica alterata o un’espressione disregolata di DNAJB1 è stata associata a squilibri della proteostasi e a fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi contesti di neurodegenerazione e di stress oncogenico, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici dell’omeostasi proteica.

HSP 40 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNAJB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNAJB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNAJB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNAJB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.