hnRNP M Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401670-ACT

HNRNPM codifica a ribonucleoproteína nuclear heterogénea M (hnRNP M), uma proteína de ligação a RNA que se associa a transcritos nascente para regular o processamento do pré‑mRNA, o splicing alternativo e a maturação do mRNA. A hnRNP M participa do metabolismo de RNA relacionado ao espliceossomo e influencia a seleção de isoformas de transcritos, o que pode afetar programas de estado celular como proliferação, diferenciação e expressão gênica adaptativa ao estresse. A desregulação de redes de splicing dependentes de HNRNPM tem sido associada a alterações na transição epitélio–mesênquima e a assinaturas aberrantes de processamento de RNA observadas em múltiplos contextos de doença, tornando-o um nó útil para estudar as consequências, em nível de via, de perturbações em fatores de splicing. A modulação experimental dos níveis de hnRNP M pode ajudar a mapear eventos de troca de isoformas, dependências de interação RNA–proteína e alterações de sinalização a jusante impulsionadas pela remodelação do transcriptoma.

hnRNP M O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNRNPM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP M O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNRNPM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNRNPM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP M. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNRNPM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP M no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP M em células tumorais com expressão de HNRNPM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.