hnRNP L Plasmide Double Nickase (h): sc-402196-NIC

L’HNRNPL umano codifica hnRNP L, una proteina legante l’RNA che riconosce elementi ricchi in CA per coordinare lo splicing alternativo del pre-mRNA, la stabilizzazione dei trascritti e la loro elaborazione nucleocitoplasmatica. hnRNP L agisce all’interno di complessi spliceosomiali e ribonucleoproteici per modulare l’inclusione degli esoni e l’accoppiamento tra trascrizione e maturazione dell’RNA, influenzando programmi quali il controllo del ciclo cellulare e l’espressione genica in risposta allo stress. Attraverso la regolazione dell’espressione specifica per isoforma, hnRNP L può modulare a livello post-trascrizionale gli output di segnalazione, inclusi i pathway MAPK e quelli correlati all’apoptosi. Un’attività deregolata di hnRNP L e alterazioni dello splicing sono state associate a fenotipi proliferativi e a pattern anomali di processamento dell’RNA osservati in diverse malattie umane, rendendolo un bersaglio di grande interesse per studi meccanicistici sulla regolazione genica dipendente dallo splicing.

hnRNP L Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HNRNPL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HNRNPL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HNRNPL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HNRNPL interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.