hnRNP E1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423930

Panoramica

Pcbp1 codifica la proteina murina eterogenea ribonucleoproteica nucleare E1 (hnRNP E1), una proteina legante l’RNA che riconosce elementi ricchi in C per controllare la stabilità e la traduzione dell’mRNA. hnRNP E1 partecipa alla regolazione genica post-trascrizionale associata alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte allo stress e alla differenziazione, modulando la disponibilità dei trascritti nel citoplasma e la loro traduzione a livello dei ribosomi. Attraverso i suoi ruoli nel processamento dell’RNA e nel controllo della traduzione, hnRNP E1 influenza vie associate alla transizione epitelio-mesenchimale, al rimodellamento del citoscheletro e a programmi di espressione genica dipendenti dalla segnalazione. Un’attività deregolata di PCBP1/hnRNP E1 è stata associata, in modelli sperimentali, ad alterazioni dell’omeostasi dell’RNA e a fenotipi rilevanti per la biologia tumorale e la segnalazione infiammatoria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP E1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pcbp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pcbp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pcbp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina hnRNP E1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pcbp1 per lo studio della segnalazione di hnRNP E1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pcbp1 critici per la funzione di hnRNP E1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pcbp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal hnRNP E1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal hnRNP E1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pcbp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal hnRNP E1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR hnRNP E1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pcbp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pcbp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.