hnRNP E1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401557-ACT

PCBP1 codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea E1 (hnRNP E1), un fattore legante RNA e DNA che coordina la regolazione genica post-trascrizionale controllando la stabilità dell’mRNA, lo splicing alternativo, il trasporto e la traduzione. hnRNP E1 riconosce elementi di sequenza ricchi in citosina (C-rich) all’interno dei trascritti bersaglio e partecipa a complessi ribonucleoproteici che integrano input di segnalazione con la sintesi proteica regolata. Attraverso queste attività, PCBP1 contribuisce a processi cellulari che includono la differenziazione, le risposte allo stress e il mantenimento dell’omeostasi del proteoma. Alterazioni dell’espressione o della funzione di PCBP1/hnRNP E1 sono state associate a programmi di espressione genica deregolati osservati nella biologia del cancro e in altri disturbi legati a un processamento anomalo dell’RNA.

hnRNP E1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PCBP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hnRNP E1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PCBP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PCBP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hnRNP E1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PCBP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hnRNP E1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hnRNP E1 nelle cellule tumorali con espressione di PCBP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.