HMGI-C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401573-ACT

HMGA2 codifica la proteina architetturale della cromatina HMGI-C, una proteina HMG non istonica che si lega a regioni di DNA ricche in AT per modulare l’organizzazione dei nucleosomi e i programmi trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento e stati simili a quelli staminali. Partecipa a reti di rimodellamento della cromatina e coopera con vie come la segnalazione TGF-β/SMAD e la regolazione post-trascrizionale LIN28/let-7, influenzando la transizione epitelio-mesenchimale, la progressione del ciclo cellulare e la tempistica dello sviluppo. Un’espressione deregolata di HMGA2 è associata a paesaggi trascrizionali alterati in molteplici contesti tumorali ed è una caratteristica ricorrente delle neoplasie mesenchimali, a supporto della sua ampia rilevanza nella trasformazione oncogenica e nel rimodellamento tissutale. In quanto regolatore nucleare con un’ampia influenza genomica, HMGA2 è spesso studiato per i suoi ruoli nell’organizzazione del genoma, nell’impegno di linea e nella cooperatività tra fattori di trascrizione.

HMGI-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HMGA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HMGI-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HMGA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HMGA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HMGI-C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HMGA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HMGI-C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HMGI-C nelle cellule tumorali con espressione di HMGA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.