HLA-DQA1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403480-ACT

HLA-DQA1 codifica la catena alfa dell’eterodimero HLA-DQ, una molecola del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di classe II espressa principalmente sulle cellule presentanti l’antigene. Nella via endosomiale di processamento e presentazione dell’antigene, HLA-DQ lega antigeni peptidici e li espone sulla superficie cellulare alle cellule T CD4+, modulando l’attivazione dell’immunità adattativa, la tolleranza e la polarizzazione immunitaria guidata dalle citochine. Le variazioni in HLA-DQA1 influenzano la specificità di legame dei peptidi e sono state associate a un’alterata riconoscimento immunitario in contesti autoimmuni e infiammatori, tra cui la celiachia e il diabete di tipo 1. In quanto locus all’interno della regione HLA, è ampiamente studiato per i suoi effetti sul repertorio immunitario, sulle risposte delle cellule T specifiche per l’antigene e sulle architetture di rischio immunogenetico.

HLA-DQA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HLA-DQA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HLA-DQA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HLA-DQA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-DQA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HLA-DQA1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HLA-DQA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HLA-DQA1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HLA-DQA1 nelle cellule tumorali con espressione di HLA-DQA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.