Histone Deacetylase 9 (HDAC9) Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401419-ACT

HDAC9 codifica la deacetilasi istonica 9, una HDAC di classe IIa che modula l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali regolando interazioni proteina–proteina dipendenti dall’acetilazione e reclutando complessi corepressori. HDAC9 partecipa al controllo epigenetico della differenziazione cellulare, della segnalazione in risposta allo stress e della regolazione dei geni metabolici, con ruoli di rilievo nella biologia muscolare e delle cellule immunitarie. Attraverso il crosstalk con reti trascrizionali collegate a MEF2 e NF-κB, HDAC9 influenza le transizioni di stato cellulare e l’espressione di geni infiammatori. Un’attività o un’espressione deregolata di HDAC9 è stata associata ad alterazioni di firme trascrizionali neuroevolutive, cardiovascolari e oncogeniche, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici della regolazione epigenetica.

Histone Deacetylase 9 (HDAC9) Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HDAC9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Histone Deacetylase 9 (HDAC9) Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HDAC9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HDAC9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Histone Deacetylase 9 (HDAC9). A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HDAC9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Histone Deacetylase 9 (HDAC9) nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Histone Deacetylase 9 (HDAC9) nelle cellule tumorali con espressione di HDAC9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.