Histone cluster 1 H1E Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402775

Panoramica

HIST1H1E codifica per la histone cluster 1 H1E, una variante dell’istone H1 “linker” dipendente dalla replicazione che si lega al DNA nucleosomiale per stabilizzare la struttura della cromatina di ordine superiore e influenzare la compattazione del genoma. Modulando l’accessibilità della cromatina, H1E contribuisce a regolare i programmi trascrizionali, la tempistica della replicazione del DNA e le risposte al danno al DNA attraverso effetti sul rimodellamento della cromatina e sul reclutamento dei fattori di riparazione. Alterazioni della stechiometria della famiglia H1 e della dinamica degli istoni linker sono state associate alla disregolazione epigenetica osservata nel cancro e nei disturbi del neurosviluppo, e perturbazioni correlate a HIST1H1E possono influire sulle decisioni di destino cellulare e sulla stabilità genomica. In quanto parte del locus Histone cluster 1, HIST1H1E è rilevante anche per studi sull’espressione degli istoni accoppiata alla fase S e sull’assemblaggio della cromatina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Histone cluster 1 H1E (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HIST1H1E in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HIST1H1E insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HIST1H1E a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Histone cluster 1 H1E.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HIST1H1E per lo studio della segnalazione di Histone cluster 1 H1E, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HIST1H1E critici per la funzione di Histone cluster 1 H1E
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HIST1H1E per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Histone cluster 1 H1E CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Histone cluster 1 H1E CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HIST1H1E. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Histone cluster 1 H1E Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Histone cluster 1 H1E (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HIST1H1E per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HIST1H1E definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.