Hic-5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402786-NIC

TGFB1I1 codifica Hic-5 (nota anche come ARA55), una proteina adattatrice delle adesioni focali contenente domini LIM che integra i segnali della matrice extracellulare con il rimodellamento del citoscheletro e con risposte trascrizionali. Hic-5 si localizza nelle adesioni focali e nel nucleo, dove funge da piattaforma per complessi di segnalazione collegati alla via integrina/FAK–SRC, alla regolazione delle GTPasi della famiglia Rho e ai percorsi di meccanotrasduzione che coordinano adesione, migrazione e dinamica delle fibre di stress. È inducibile da TGF-β e partecipa a programmi di rimodellamento dipendenti da TGF-β, inclusi effetti specifici del contesto sulla transizione epitelio-mesenchimale e sull’attivazione dei fibroblasti. Un’attività deregolata di TGFB1I1/Hic-5 è stata associata ai processi di invasione e metastatizzazione delle cellule tumorali, a reti di segnalazione fibrotica e al rimodellamento del microambiente infiammatorio, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale dipendente dall’adesione.

Hic-5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TGFB1I1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TGFB1I1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TGFB1I1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TGFB1I1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.