Hex Plasmide Double Nickase (h): sc-403827-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Hex Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Hex Double Nickase Plasmid (h) e il Hex Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HHEX. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Hex Antibody (HHE5I261): sc-81284
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Hex Plasmide Double Nickase (h) | sc-403827-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hex Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403827-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’HHEX umano codifica Hex, un fattore di trascrizione homeobox che coordina la specificazione di linea e l’organogenesi, con ruoli di rilievo nel patterning dell’endoderma e nello sviluppo ematopoietico precoce. Hex integra programmi trascrizionali dipendenti dal contesto che influenzano le decisioni sul destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione attraverso reti regolatorie che intersecano vie di segnalazione dello sviluppo come Wnt, BMP e TGF-β. Nei tessuti maturi, HHEX contribuisce alla biologia vascolare e delle cellule immunitarie, e un’espressione deregolata è stata collegata a stati di differenziazione alterati e a circuiti trascrizionali oncogenici in diverse neoplasie. Poiché HHEX funge da nodo nelle reti regolatorie geniche dello sviluppo e dell’ematopoiesi, viene spesso studiato per mappare l’uso degli enhancer, i bersagli trascrizionali e gli stati della cromatina specifici del contesto.
Hex Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HHEX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HHEX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HHEX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HHEX interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.