Plásmido CRISPR de Activación (h) Herc2: sc-405015-ACT

HERC2 codifica la ligasa E3 de ubiquitina-proteína humana Herc2, una gran ligasa de ubiquitina con dominio HECT que coordina la proteostasis y la señalización dependientes de ubiquitina. Herc2 participa en redes de respuesta al daño del ADN y en procesos asociados a la cromatina, ayudando a modular el recambio proteico y la localización de reguladores clave implicados en la estabilidad del genoma, la progresión del ciclo celular y la señalización de estrés. Mediante la ubiquitinación y funciones tipo andamiaje, HERC2 influye en vías vinculadas al estrés replicativo y la reparación, y la alteración de su actividad se ha asociado con fenotipos neurodelirrollo hereditarios y defectos de mantenimiento del genoma relevantes para el cáncer. Estas propiedades hacen de HERC2 una diana útil para estudiar la regulación de la vía de la ubiquitina, la interacción entre rutas de reparación del ADN y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares humanos.

Herc2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HERC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Herc2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HERC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HERC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Herc2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HERC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Herc2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Herc2 en células tumorales con expresión de HERC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.