Heme Oxygenase 1/HMOX1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400157-ACT

HMOX1 (eme ossigenasi 1) è un enzima inducibile della risposta allo stress che catalizza la degradazione dell’eme in biliverdina, ferro libero e monossido di carbonio, collegando il metabolismo dell’eme all’equilibrio redox cellulare. La sua espressione è fortemente regolata dallo stress ossidativo ed elettrofilo attraverso vie che includono NRF2–KEAP1 e la segnalazione infiammatoria, e modula la funzione mitocondriale, la gestione del ferro e programmi antiossidanti citoprotettivi. L’attività di HMOX1 influenza la polarizzazione dei macrofagi, le risposte endoteliali e l’adattamento dei tessuti a ipossia e infiammazione, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo meccanicistico nella biologia dello stress. Una disregolazione di HMOX1 è stata associata a processi cardiometabolici e neuroinfiammatori, al rimodellamento del microambiente tumorale e a una suscettibilità alterata al danno ossidativo, a supporto della sua ampia rilevanza nella modellazione delle malattie e nell’analisi delle vie di segnalazione.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HMOX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HMOX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HMOX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Heme Oxygenase 1/HMOX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HMOX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Heme Oxygenase 1/HMOX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Heme Oxygenase 1/HMOX1 nelle cellule tumorali con espressione di HMOX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.