HELZ Plasmide Double Nickase (h): sc-411392-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HELZ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HELZ Double Nickase Plasmid (h) e il HELZ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HELZ. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HELZ Antibody (FA-52): sc-130438
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HELZ Plasmide Double Nickase (h) | sc-411392-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HELZ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-411392-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La HELZ umana codifica una proteina legante l’RNA di tipo elicasi, dotata di motivi a dita di zinco, che si associa ai ribosomi in traduzione e contribuisce alla regolazione genica post-trascrizionale. HELZ è stata collegata al controllo del metabolismo dell’mRNA, inclusi l’efficienza di traduzione e la degradazione, nonché a programmi più ampi che governano la crescita cellulare e le risposte allo stress. Attraverso effetti sulla processazione dell’RNA e sulla sintesi proteica, HELZ può influenzare vie di segnalazione che determinano stati di proliferazione e differenziamento. Reti regolatorie dell’RNA alterate che coinvolgono HELZ sono state osservate in contesti rilevanti per la biologia tumorale e per altre malattie in cui il controllo della traduzione è perturbato.
HELZ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HELZ nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HELZ. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HELZ. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HELZ interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.