HECTD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406532

Übersicht

HECTD3 kodiert eine HECT-Domänen-E3-Ubiquitin-Ligase, die die Übertragung von Ubiquitin auf Zielproteine katalysiert und dadurch deren Stabilität, Lokalisation und Signalausgabe beeinflusst. Es wurde mit der Regulation der angeborenen Immun- und Entzündungssignalgebung in Verbindung gebracht, einschließlich der Modulation von NF-κB- und interferonassoziierten Signalwegen über eine ubiquitinabhängige Kontrolle von Pathway-Komponenten. Durch die Feinabstimmung von Proteostase und Signaltransduktion kann HECTD3 zelluläre Stressantworten, Proliferation und Apoptose beeinflussen. Fehlregulierte Ubiquitinierungsprogramme unter Beteiligung von HECTD3 wurden mit krebsbezogenen Phänotypen und immunvermittelten Krankheitsmechanismen assoziiert, was seinen Einsatz in Modellen zur Analyse von Signalwegen unterstützt.

Das HECTD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HECTD3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HECTD3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HECTD3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HECTD3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HECTD3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HECTD3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HECTD3-Exone abzielen, die für die HECTD3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HECTD3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HECTD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HECTD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HECTD3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HECTD3 HDR-Plasmid (h) und HECTD3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HECTD3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HECTD3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.