HECTD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409864

Panoramica

HECTD1 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo HECT che media l’ubiquitinazione dei substrati per regolare la proteostasi, il turnover proteico e l’ampiezza della segnalazione in molteplici contesti cellulari. Controllando il traffico e la degradazione, dipendenti dall’ubiquitina, dei componenti delle vie di segnalazione, HECTD1 può influenzare processi quali la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la dinamica del citoscheletro, che dipendono da un rimodellamento tempestivo delle reti proteiche. Un’attività di ligasi E3 deregolata è spesso associata a un’alterata fedeltà della segnalazione e a fenotipi cellulari aberranti, rendendo HECTD1 un nodo rilevante per lo studio della funzione del sistema ubiquitina–proteasoma nelle cellule umane. La ricerca su HECTD1 supporta indagini meccanicistiche su come l’ubiquitinazione si integri con programmi di segnalazione importanti per lo sviluppo e associati a patologie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HECTD1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HECTD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HECTD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HECTD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HECTD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HECTD1 per lo studio della segnalazione di HECTD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HECTD1 critici per la funzione di HECTD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HECTD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HECTD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HECTD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HECTD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HECTD1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HECTD1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HECTD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HECTD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.