HDC Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403606-ACT

Il gene umano **HDC** codifica la **istidina decarbossilasi**, l’enzima limitante la velocità che converte la **L-istidina** in **istamina**, un’ammina biogena che modella la segnalazione infiammatoria e neuroimmune. L’istamina prodotta da mastociti, basofili e altre linee mieloidi che esprimono HDC modula vie mediate da GPCR (recettori H1–H4), influenzando il rilascio di citochine, la permeabilità vascolare e il traffico dei leucociti. L’attività di HDC contribuisce anche alla regolazione dell’acidità gastrica tramite segnalazione paracrina e influisce sulla neurotrasmissione nel sistema nervoso centrale. Una biologia dell’istamina deregolata è stata associata a infiammazione allergica, asma e altre condizioni immuno-mediate, rendendo HDC un nodo utile per studiare l’immunità innata e la segnalazione del microambiente tissutale.

HDC Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HDC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HDC Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HDC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HDC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HDC. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HDC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HDC nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HDC nelle cellule tumorali con espressione di HDC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.