HAX-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402087-ACT

HAX1 codifica HAX-1, una proteina localizzata prevalentemente ai mitocondri e associata al reticolo endoplasmatico, che regola l’apoptosi, l’omeostasi del calcio e la dinamica del citoscheletro. Partecipa ai segnali di risposta allo stress e di sopravvivenza modulando l’integrità della membrana mitocondriale e interagendo con processi correlati alla famiglia BCL-2, influenzando l’attivazione delle caspasi e l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno. HAX-1 contribuisce inoltre al rimodellamento dell’actina e al traffico intracellulare, collegandosi così ai programmi di migrazione e adesione cellulare. Un’alterazione dell’espressione o della funzione di HAX1 è stata associata a cambiamenti nella sopravvivenza delle cellule ematopoietiche, nell’omeostasi delle cellule immunitarie e nella biologia tumorale, rendendolo un bersaglio utile per studiare le vie di sopravvivenza e le decisioni di destino cellulare.

HAX-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HAX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HAX-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HAX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HAX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HAX-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HAX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HAX-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HAX-1 nelle cellule tumorali con espressione di HAX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.