Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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hamartin Plasmide Double Nickase (h): sc-402444-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- hamartin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il hamartin Double Nickase Plasmid (h) e il hamartin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TSC1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: hamartin Antibody (C-8): sc-377386
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
hamartin Plasmide Double Nickase (h) | sc-402444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
hamartin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TSC1 codifica per l’amartina, un componente fondamentale del complesso TSC1–TSC2, che integra segnali derivanti da nutrienti e fattori di crescita per frenare la segnalazione di mTORC1 attraverso la regolazione della piccola GTPasi Rheb. Modulando la sintesi proteica dipendente da mTORC1, l’autofagia e il metabolismo cellulare, l’amartina contribuisce al controllo della crescita cellulare, della proliferazione e delle risposte allo stress. L’alterazione di TSC1 compromette l’omeostasi della via PI3K–AKT–mTOR e modifica i programmi traduttivi e lisosomiali a valle. La variabilità genetica o la perdita di funzione di TSC1 è fortemente associata alla biologia della sclerosi tuberosa complessa e a fenotipi cellulari correlati, guidati da mTOR, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato negli studi di via di segnalazione e dei meccanismi di malattia.
hamartin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TSC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TSC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TSC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TSC1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.