H2-Q1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420774

Panoramica

H2-Q1 codifica nel topo una molecola MHC di classe I non classica (classe Ib) che contribuisce alla presentazione dell’antigene e alla segnalazione immunoregolatoria sulla superficie cellulare. Rispetto alle molecole H-2 classiche, H2-Q1 è spesso associato a un legame peptidico specializzato e al riconoscimento da parte di sottopopolazioni di cellule T e di recettori delle cellule NK, influenzando la sorveglianza immunitaria e la tolleranza periferica. La sua espressione e funzione si intersecano con vie che controllano l’attivazione dei linfociti, l’infiammazione guidata dalle citochine e l’omeostasi tissutale mediata dal sistema immunitario. Il riconoscimento dipendente dalla classe I, quando deregolato, viene spesso studiato in contesti quali autoimmunità, infezioni e immunologia dei tumori, rendendo H2-Q1 un locus utile per analizzare i meccanismi di evasione immunitaria e di immunopatologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO H2-Q1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene H2-Q1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del H2-Q1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto H2-Q1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina H2-Q1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di H2-Q1 per lo studio della segnalazione di H2-Q1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni H2-Q1 critici per la funzione di H2-Q1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di H2-Q1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal H2-Q1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal H2-Q1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus H2-Q1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal H2-Q1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR H2-Q1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia H2-Q1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio H2-Q1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.