H-Ras Plasmide Double Nickase (h): sc-400204-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- H-Ras Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il H-Ras Double Nickase Plasmid (h) e il H-Ras Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HRAS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: H-Ras Antibody (M90): sc-53959
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
H-Ras Plasmide Double Nickase (h) | sc-400204-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
H-Ras Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400204-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HRAS codifica la piccola GTPasi umana H-Ras, un interruttore molecolare associato alla membrana che alterna ciclicamente stati legati a GDP e a GTP per trasmettere segnali provenienti dai recettori tirosin-chinasici e da altri input a monte. Una volta attivata, H-Ras coinvolge la segnalazione RAF–MEK–ERK e PI3K–AKT, integrando stimoli che regolano proliferazione, differenziamento, dinamica del citoscheletro e sopravvivenza. Un controllo rigoroso dell’idrolisi del GTP da parte di GEF e GAP è essenziale per garantire ampiezza e durata normali del segnale, e la disregolazione della segnalazione RAS è fortemente associata alla trasformazione oncogena e a programmi di crescita aberranti. HRAS è quindi ampiamente utilizzato come locus modello per analizzare la regolazione della via MAPK, i meccanismi di feedback e l’output del segnale dipendente dal contesto nelle cellule umane.
H-Ras Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HRAS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HRAS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HRAS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HRAS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.