GSK3 beta Plasmide Double Nickase (h): sc-400090-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GSK3 beta Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GSK3 beta Double Nickase Plasmid (h) e il GSK3 beta Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GSK3B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GSK3 beta Antibody (E-11): sc-377213
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GSK3 beta Plasmide Double Nickase (h) | sc-400090-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSK3 beta Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400090-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GSK3B** codifica la glicogeno sintasi chinasi-3 beta (**GSK3 beta**), una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva che integra segnali provenienti da vie dei fattori di crescita, del metabolismo e dello stress. GSK3 beta è un nodo chiave nella segnalazione **PI3K–AKT** e nella regolazione della via **Wnt/β-catenina**, influenzando il controllo dipendente dalla fosforilazione del metabolismo del glicogeno, della progressione del ciclo cellulare, dell’apoptosi e della differenziazione. Attraverso la modulazione di fattori di trascrizione e regolatori del citoscheletro, contribuisce a plasmare i circuiti che governano la funzione neuronale, la risposta all’insulina e la segnalazione infiammatoria. L’alterazione dell’attività di GSK3B e lo squilibrio delle vie Wnt/AKT sono frequentemente oggetto di studio nella biologia del cancro, nella neurodegenerazione e nei meccanismi delle malattie metaboliche.
GSK3 beta Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSK3B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSK3B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSK3B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSK3B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.