GRP 75 Plasmide Double Nickase (h): sc-400471-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRP 75 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GRP 75 Double Nickase Plasmid (h) e il GRP 75 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HSPA9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRP 75 Antibody (D-9): sc-133137
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRP 75 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRP 75 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA9 codifica GRP75 (mortalin), uno chaperone mitocondriale della famiglia HSP70 che supporta l’importazione, il ripiegamento e il controllo qualità delle proteine codificate dal nucleo all’interno della matrice mitocondriale. GRP75 regola la proteostasi mitocondriale, il mantenimento del potenziale di membrana e le risposte adattative allo stress, collegando l’attività chaperonica all’efficienza della fosforilazione ossidativa e all’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. Partecipa inoltre alla comunicazione tra mitocondri e reticolo endoplasmatico (RE) e alla gestione del calcio, integrando il crosstalk tra organelli con il metabolismo cellulare. Una funzione deregolata di HSPA9/GRP75 è stata associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale, a una tolleranza allo stress alterata e a vie rilevanti per il cancro e la neurodegenerazione, in cui risultano compromessi la proteostasi e il rimodellamento bioenergetico.
GRP 75 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSPA9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSPA9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSPA9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSPA9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.