GPT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403739-ACT

A GPT2 humana (transaminase glutâmico‑pirúvica 2; aminotransferase de alanina mitocondrial) catalisa a transaminação reversível entre alanina e α‑cetoglutarato para gerar piruvato e glutamato, conectando o metabolismo de aminoácidos ao fluxo de carbono mitocondrial. Ao sustentar a anaplerose e o processamento de glutamato, a GPT2 contribui para o equilíbrio de nitrogênio e a homeostase energética, influenciando vias ligadas ao ciclo do TCA e ao estado redox. Alterações na atividade da GPT2 têm sido investigadas em contextos de reprogramação metabólica e disfunção mitocondrial, nos quais mudanças na interconversão alanina–piruvato podem afetar a proliferação celular e respostas ao estresse. Como enzima mitocondrial, a GPT2 também é relevante para estudos de metabolismo específico por tecido e de programas de utilização de nutrientes.

GPT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPT2 em células tumorais com expressão de GPT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.