GPRC5B Plasmide Double Nickase (m): sc-425694-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPRC5B Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPRC5B Double Nickase Plasmid (m) e il GPRC5B Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Gprc5b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPRC5B Plasmide Double Nickase (m) | sc-425694-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPRC5B Plasmide Double Nickase (m2) | sc-425694-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Gprc5b** codifica **GPRC5B**, una proteina di membrana simile a un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) orfano, implicata nella modulazione delle cascate di segnalazione intracellulari a valle di stimoli mediati da fattori di crescita e citochine. GPRC5B è stata associata alla regolazione dell’attività delle vie **MAPK/ERK** e **PI3K–AKT**, influenzando proliferazione e differenziamento cellulare, nonché l’omeostasi metabolica in modo dipendente dal tessuto. Nel sistema nervoso e nei tessuti periferici, un’alterata espressione di GPRC5B è stata collegata alla segnalazione infiammatoria, alla sensibilità all’insulina e alla gestione dei lipidi, rendendola rilevante per studi su fenotipi associati all’obesità e a disfunzioni cardiometaboliche. La sua localizzazione di membrana e il contesto di segnalazione supportano inoltre indagini sulle dinamiche delle reti prossimali al recettore e sui programmi trascrizionali responsivi a stimoli extracellulari.
GPRC5B Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Gprc5b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Gprc5b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Gprc5b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Gprc5b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.