GPR91 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403394-ACT

SUCNR1 codifica o receptor humano de succinato GPR91, um GPCR sensor de metabólitos que conecta o aumento do succinato extracelular a programas de sinalização a jusante, incluindo as vias MAPK/ERK e dependentes de cálcio. A ativação do GPR91 integra o estado metabólico celular a respostas inflamatórias e ao estresse, influenciando o comportamento de células vasculares e imunes e modulando a sinalização de citocinas e quimiocinas. A desregulação da sinalização succinato–SUCNR1 tem sido implicada em condições associadas à hipóxia e à disfunção mitocondrial, incluindo a fisiopatologia cardiometabólica e renal, bem como remodelamento tecidual e respostas angiogênicas aberrantes. Como resultado, o eixo SUCNR1/GPR91 constitui um ponto útil para estudar imunometabolismo, transdução de sinal mediada por GPCR e sensoriamento do microambiente em sistemas modelo humanos.

GPR91 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SUCNR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR91 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SUCNR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SUCNR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR91. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SUCNR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR91 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR91 em células tumorais com expressão de SUCNR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.