GPR54 Plasmide Double Nickase (h): sc-403766-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR54 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR54 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR54 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KISS1R. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR54 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403766-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR54 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403766-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KISS1R codifica il recettore accoppiato a proteina G GPR54 (noto anche come KISS1R), un recettore ad alta affinità per le kisspeptine che regola l’attività dei neuroni GnRH e collega segnali metabolici e dello sviluppo all’attivazione dell’asse ipotalamo–ipofisi–gonadi. In seguito al legame con il ligando, GPR54 segnala principalmente attraverso Gαq/11 per stimolare la fosfolipasi C, la mobilizzazione del Ca²⁺ intracellulare e l’attività a valle della via MAPK/ERK, influenzando l’espressione genica e la secrezione neuroendocrina. Un’alterata segnalazione di KISS1R è associata a fenotipi endocrini riproduttivi, tra cui l’ipogonadismo ipogonadotropo e disturbi della tempistica puberale, ed è stata studiata anche per il suo possibile ruolo nei programmi di migrazione e invasione cellulare in diversi sistemi modello. Queste caratteristiche rendono KISS1R un bersaglio utile per indagare la segnalazione del calcio guidata dai GPCR, la regolazione neuroendocrina e il crosstalk tra vie di segnalazione nelle cellule umane.
GPR54 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KISS1R nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KISS1R. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KISS1R. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KISS1R interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.