GPR41 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402190

Panoramica

FFAR3 codifica il recettore accoppiato a proteina G GPR41, un sensore di superficie cellulare per gli acidi grassi a catena corta come acetato, propionato e butirrato prodotti dalla fermentazione microbica. In seguito al legame con il ligando, GPR41 si accoppia principalmente alla segnalazione Gi/o, riducendo i livelli di cAMP e modulando vie a valle che, in modo dipendente dal contesto, influenzano il metabolismo cellulare, i programmi secretori e il tono infiammatorio. L’attività di FFAR3 è stata associata alla comunicazione ospite–microbioma, alla regolazione dell’equilibrio energetico e a reti di segnalazione neuroendocrine e immunitarie. L’alterazione della segnalazione FFAR3/GPR41 è oggetto di studio nella biologia delle malattie metaboliche e infiammatorie, dove può incidere su adiposità, sensibilità all’insulina e risposte associate alle citochine, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR41 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FFAR3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FFAR3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FFAR3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR41.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FFAR3 per lo studio della segnalazione di GPR41, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FFAR3 critici per la funzione di GPR41
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FFAR3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR41 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR41 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FFAR3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR41 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR41 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FFAR3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FFAR3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.