GPR39 Plasmide Double Nickase (h): sc-410802-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR39 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR39 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR39 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR39. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR39 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR39 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR39 codifica un recettore accoppiato a proteine G attivato dallo zinco, prevalentemente associato alla segnalazione mediata da Gαq/11 e Gαs, che integra segnali extracellulari traducendoli in risposte di secondi messaggeri come l’attivazione della fosfolipasi C, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e la produzione di cAMP. Attraverso queste vie, GPR39 può influenzare programmi trascrizionali che regolano la sopravvivenza e la proliferazione cellulare, la funzione di barriera epiteliale ed endoteliale e l’omeostasi metabolica. Il recettore è stato studiato in contesti che includono la fisiologia gastrointestinale, la segnalazione infiammatoria e la regolazione neuroendocrina, in cui dinamiche alterate della segnalazione dei GPCR possono rimodellare le risposte tissutali allo stress. La disregolazione della segnalazione associata a GPR39 è stata indagata in molteplici processi rilevanti per la malattia, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla percezione dello zinco, la desensibilizzazione dei GPCR e le cascate chinasi a valle.
GPR39 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR39 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR39. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR39. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR39 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.