GPR35 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425672-ACT

Il gene murino **Gpr35** codifica **GPR35**, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) espresso in tipi cellulari del sistema immunitario e dell’apparato gastrointestinale, dove modula le risposte chemiotattiche, la segnalazione citochinica e i programmi legati alla barriera epiteliale. L’attività di GPR35 è associata a vie di secondi messaggeri mediate da GPCR, inclusa la segnalazione dipendente da Gαi/o, il reclutamento di β-arrestina e la regolazione a valle di MAPK/ERK e di risposte trascrizionali correlate. In modelli sperimentali, alterazioni della segnalazione di GPR35 sono state associate ai circuiti infiammatori intestinali e a una più ampia omeostasi immunitaria, a supporto della sua rilevanza negli studi sull’infiammazione mucosale e sul rimodellamento tissutale mediato dal sistema immunitario. Poiché GPR35 risponde a segnali metabolici e infiammatori, viene spesso studiato in contesti che collegano metaboliti microbici, sensing dei nutrienti e funzione leucocitaria.

GPR35 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gpr35 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GPR35 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gpr35 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gpr35, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GPR35. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gpr35 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GPR35 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GPR35 nelle cellule tumorali con espressione di Gpr35 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.