GPR22 Plasmide Double Nickase (h): sc-418054-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR22 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR22 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR22 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR22. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR22 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418054-NIC | 20 µg | $410.00 |
GPR22 codifica un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) orfano, che si prevede regoli la trasduzione del segnale a livello della membrana plasmatica tramite proteine G eterotrimeriche e vie a valle di secondi messaggeri come cAMP/PKA e MAPK. Sebbene il suo ligando endogeno rimanga poco chiaro, l’espressione di GPR22 è stata associata alla modulazione delle risposte cellulari allo stress e dell’omeostasi metabolica, in linea con il ruolo più ampio dei GPCR nel controllo di programmi trascrizionali, flussi ionici e segnalazione mediata da chinasi. Nei tessuti umani, alterazioni dell’espressione di GPR22 sono state riportate in contesti cardiovascolari e metabolici, e il recettore è stato studiato per il suo potenziale contributo a fenotipi associati a ipertrofia e rimodellamento. Queste caratteristiche rendono GPR22 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla biologia dei GPCR, sull’architettura delle vie di segnalazione e sulle relazioni genotipo-fenotipo in modelli cellulari pertinenti.
GPR22 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR22 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR22. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR22. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR22 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.