GPR19 Plasmide Double Nickase (h): sc-407000-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR19 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR19 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR19 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR19. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR19 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407000-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR19 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407000-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR19 codifica un recettore orfano di classe A accoppiato a proteine G (GPCR), localizzato prevalentemente su membrane intracellulari, ed è stato implicato nella regolazione della segnalazione dei nucleotidi ciclici, dei programmi di sopravvivenza cellulare e dell’omeostasi neuronale/endocrina. Studi funzionali riportati collegano GPR19 alla modulazione delle vie MAPK/ERK e dipendenti dal cAMP, suggerendo ruoli nell’accoppiamento stimolo–risposta e nel controllo trascrizionale a valle della segnalazione mediata da GPCR. I pattern di espressione e le associazioni genetiche/omiche hanno messo in relazione GPR19 con fenotipi neurocomportamentali e processi neurodegenerativi, incluse correlazioni descritte in dataset relativi alla malattia di Parkinson. In quanto nodo di segnalazione di membrana con ligandi ed effettori a valle non ancora completamente definiti, GPR19 è di interesse per analizzare il cablaggio delle vie GPCR e la segnalazione dipendente dal contesto in modelli cellulari umani.
GPR19 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR19 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR19. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR19. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR19 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.