GPR142 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-415656

Panoramica

GPR142 codifica il recettore accoppiato a proteine G 142, un GPCR orfano/di classe A arricchito in tessuti metabolicamente rilevanti e associato al sensing dei nutrienti. In seguito all’attivazione, GPR142 si accoppia a proteine G eterotrimeriche per regolare la segnalazione dei secondi messaggeri e le vie calcio-dipendenti che influenzano la secrezione ormonale e, più in generale, l’omeostasi metabolica. Studi trascrizionali e genetici hanno associato GPR142 a fenotipi endocrini e metabolici, includendo vie rilevanti per la regolazione del glucosio e la funzione delle isole pancreatiche. In quanto recettore di superficie cellulare, rappresenta un nodo sperimentalmente accessibile per studiare la segnalazione dei GPCR, la scoperta di ligandi e i programmi trascrizionali guidati dal recettore.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR142 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPR142 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPR142 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPR142 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR142.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPR142 per lo studio della segnalazione di GPR142, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPR142 critici per la funzione di GPR142
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPR142 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR142 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR142 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPR142. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR142 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR142 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPR142 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPR142 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.