GPR116 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-408424-LAC

ADGRF5 codifica per il recettore di adesione accoppiato a proteine G GPR116, un recettore di membrana coinvolto in programmi di segnalazione cellula–cellula e cellula–matrice che modellano l’omeostasi di epiteli ed endoteli. In quanto aGPCR, GPR116 può accoppiarsi a proteine G eterotrimeriche per influenzare la segnalazione dei secondi messaggeri e la dinamica del citoscheletro, con ruoli riportati nella regolazione delle proprietà di barriera, del tono infiammatorio e del rimodellamento tissutale. Nel polmone, GPR116 è stato collegato alla regolazione del surfattante e alla stabilità alveolare, connettendo l’attività del recettore a vie che controllano la gestione dei lipidi e la funzione epiteliale. Un’espressione alterata di ADGRF5/GPR116 è stata osservata in contesti pertinenti all’infiammazione e alla biologia del cancro, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per studiare fenotipi guidati dai GPCR nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR116 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ADGRF5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR116 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ADGRF5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GPR116. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ADGRF5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.