GPR116 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-408424-LAC

ADGRF5 codifica o receptor de adesão acoplado à proteína G GPR116, um receptor de membrana implicado em programas de sinalização célula–célula e célula–matriz que moldam a homeostase epitelial e endotelial. Como um aGPCR, o GPR116 pode acoplar-se a proteínas G heterotriméricas para influenciar a sinalização por segundos mensageiros e a dinâmica do citoesqueleto, com funções descritas na regulação das propriedades de barreira, do tônus inflamatório e do remodelamento tecidual. No pulmão, o GPR116 tem sido associado à regulação do surfactante e à estabilidade alveolar, conectando a atividade do receptor a vias que controlam o manejo de lipídios e a função epitelial. Alterações na expressão de ADGRF5/GPR116 foram observadas em contextos relevantes para a inflamação e a biologia do câncer, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudar fenótipos impulsionados por GPCR em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR116 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ADGRF5 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR116 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ADGRF5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de GPR116. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ADGRF5 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.