GP78 Plasmide Double Nickase (h): sc-402346-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GP78 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GP78 Double Nickase Plasmid (h) e il GP78 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AMFR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GP78 Antibody (3D9): sc-293371
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GP78 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402346-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GP78 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402346-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMFR umano codifica GP78, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING residente nel reticolo endoplasmatico (RE), centrale per la degradazione associata al RE (ERAD) e per il controllo della proteostasi da parte del sistema ubiquitina–proteasoma. GP78 coopera con enzimi E2 e componenti dell’ERAD per ubiquitinare substrati mal ripiegati o regolati, influenzando la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response), l’omeostasi di lipidi e colesterolo e, più in generale, l’adattamento cellulare allo stress. Attraverso questi processi, AMFR/GP78 è stato studiato in contesti di stress cronico del RE, alterato turnover proteico e vie collegate alla segnalazione oncogenica e a fenotipi associati alla metastasi in sistemi modello. Il suo ruolo nel controllo qualità mediato dall’ubiquitina interseca anche la dinamica mitocondriale e il crosstalk con l’autofagia, rendendolo rilevante per analizzare reti di risposta allo stress.
GP78 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AMFR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AMFR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AMFR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AMFR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.